激光共聚焦制作

    激光共聚焦制作

    共聚焦显微技术（Confocal microscopy）是通过激光扫描共聚焦显微镜来获取细胞内某个薄层面上的荧光信息, 并结合计算机自动控制和信息收集功能，对荧光信号的分布、强度和动态变化进行较好的的分析和整合, 从而得到丰富的细胞信息。

1.消除了聚焦平面以外的荧光信号的干扰, 故成像清晰

2.可以对样品不同层面进行连续逐层扫描, 再由计算机将这些图形重组为三维图像，图形清晰度高、层次分明、立体感更强

3.可对细胞某个选定结构进行长度和体积的测量, 在分析细胞空间结构和某些物质的胞内定位方面具有明显的优势

4.可同时实现多重指标的检测。目前，该技术应用范围已扩展到细胞学、微生物学、发育生物学、遗传学、神经生物学、生理和病理学等学科，成为现代生物学微观研究的重要工具

   激光共聚焦制作

使用前请注意：

1.实验设计前请了解仪器相关配置参数，选择合适的抗体或荧光染料等。我校共聚焦显微镜激光器波长分别为405nm、488nm、532nm、635nm。同时为了避免使用冲突，请提前预约使用时间。

2.细胞样品请用0.17mm的盖玻片爬片或者用共聚焦培养皿培养，组织样品后用0.17mm盖玻片封片；封片剂可用缓冲甘油或防淬灭剂等，对于活细胞，则可使其浸润于相应的溶液中，直接滴片和封片，立即观察，不加上述封片剂。

3.为了获得理想的图像，组织切片或细胞标本不能太厚及太密，并且应避免细胞重叠或杂质掩盖。

4.为保持组织细胞的完整性和所要检测物质的抗原性，非活细胞观察的样品请尽量用固定剂固定样品。

5.用前请用荧光显微镜确认一下是否有荧光，条件摸索调整合适后再使用共聚焦显微镜。

使用时，注意以下几点：

1.严格按照使用规程操作，不得改变操作程序，激光共聚焦显微镜系统中的激光器使用寿命有限且价格昂贵。所以，在操作过程中切记，在开关的启动顺序以及在扫描过程中努力做到快速有序，保护好激光器。

2.注意不要暴露在中等功率和高功率的激光辐射中，特别要注意不得注视激光束，甚至不要观看样品；不得在系统附近储存或使用易燃易爆物的固体、液体或气体；可以引燃的材料如布或纸张不得放入光路中。

3.扫描后的图像储存在计算机内，可作进一步处理。由于计算机的硬盘有限，应及时储存到用户CD光盘上，为了防止病毒浸染，禁用U盘及移动硬盘等。

使用后注意：

及时用无水乙醇将油镜镜头擦干净，物镜镜头调至低点，将显微镜周围及房间清理干净，后填写使用记录。